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菌種培養(yǎng)種子培養(yǎng)基組成為葡萄糖2%，尿素0.3%,玉米漿2.5%，豆餅水解液0.1%(以干豆餅計(jì))，調(diào)pH6.5,保溫118-120℃，滅菌30min。一級(jí)種子培養(yǎng)。在1000ml錐形瓶中加入上述培養(yǎng)基200ml,接種一環(huán)牛肉膏斜面AS（即α-乙酰乳酸合成酶）1.998菌種,30℃培養(yǎng),沖程7cm,頻率105次/min,16h。二級(jí)種子培養(yǎng)。二級(jí)種子培養(yǎng)基和一級(jí)種子培養(yǎng)基相似，另加菜籽油0.4%，接種量3.5%，培養(yǎng)8h，如此逐級(jí)放大培養(yǎng)足夠量的菌種。發(fā)酵、酸化發(fā)酵培養(yǎng)液是由硫酸銨4.5%,豆餅水解液0.4%，玉米漿2.0%,碳酸鈣4.5%,調(diào)pH至7.2，淀粉水解還原糖初糖濃度11.5所組成的。然后在5m3發(fā)酵罐中添加上述發(fā)酵培養(yǎng)液3t，加熱保溫118-120℃，控制壓力1.1×105Pa，滅菌30min后，立即通冰鹽水冷卻至25℃，接入1%菌種，以180r/min轉(zhuǎn)速攪拌保溫30-31℃，以0.21L/min通氣量發(fā)酵6Chemicalbook0h，在24-50h之間不斷添加尿素至0.6%，氨水至0.27%。待發(fā)酵60h后，將發(fā)酵液加熱至100℃，并保持10min。冷卻后過濾，除去菌體，濾液加工業(yè)用硫酸銨和草酸至pH3.5,過濾取濾液。分離、濃縮將上述濾液以每分鐘樹脂量1.5%的流速流過氫型732離子交換樹脂(400mm×1000mm)后，再用100L去離子水洗滌樹脂柱，最后以60℃，0.5mol/L的氨水，按3L/min的流速進(jìn)行洗脫，并分步收集洗脫液。合并pH為3-12的洗脫液于70-80℃減壓蒸餾濃縮至黏稠狀。再加去離子水至原體積的1/4，再濃縮至黏稠狀，趕氨，如此反復(fù)三次。脫色、濃縮、中和將上述濃縮黏稠物加去離子水至原體積的1/4，攪拌均勻，并加2mol/L的HCl調(diào)pH至3.5，再加入1%的活性炭，于70-80℃保溫?cái)嚢杳撋?h,過濾取濾液減壓濃縮，最后加入2mol/L的HCl調(diào)pH至6.0，保溫5℃，靜置沉淀過夜，抽濾取沉淀于105℃下洪干，得半成品。